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德国Lavision Biotec---双光子荧光显微镜TriM Scope
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德国Lavision Biotec
---双光子荧光显微镜TriM Scope双光子吸收/ 激发技术的原理:在强光激发下,分子同时吸收两个光子,从基态跃迁到两倍光子能量的激发态的过程。两个光子可以是相同波长的,也可以是不同波长的,但必须是同时吸收(两个光子到达被激发分子的时间间隔小于1 飞秒)。可以这样理解,先吸收一个光子的能量跃迁到一个虚拟的中间态,然后再吸收一个光子的能量跃迁到激发态。双光子显微镜相对于共聚焦等其他显微镜的优点:
- 光损伤小:由于双光子显微镜使用的是可见光或近红外光作为激发光源,这一波段的光对活体细胞和组织的光损伤小,适用于长时间的研究;
- 穿透能力强:相对于紫外光,可见光和近红外光都具有更强的穿透能力,因而受生物组织散射的影响更小,解决对生物组织中深层物质的层析成像研究问题;研究表明,共聚焦荧光成像的成像深度一般在50 微米左右,而双光子显微镜的成像深度可达1000 微米;
- 高分辨率:由于双光子吸收截面很小,只有在焦平面很小的区域内可以激发出荧光,双光子吸收仅局限于焦点处的体积约为波长3 次方的范围内;
北京大学 谢晓亮教授 (北大长江讲座教授;哈佛讲席教授,美国科学院院士)在美国哈佛大学使用LaVision BioTec的双光子显微镜之后,在北京大学建立北京生物动态光学成像中心之时,又再度引进双光子显微镜,并且给予显微镜该高度评价。 LaVision BioTec于2000在德国成立,作为一家专业的双光子显微镜和OPO振荡器、双光子分光器等设备生产商,LaVision BioTec在短短的10年内已经成功的为欧美等国家诸多大学和研究所提供了超过 110套双光子显微镜设备 和 10多套片扫描(全面扫描)荧光显微镜 ,成为该领域质量最好的供应商。LaVision BioTec 的 双光子显微镜 TriM Scope 的独 特优势(同类产品中独有的优点) : ☆ 全球 独有的多光束快速扫描模式: 用户可根据需要调节光束模式从传统的单光束扫描模式到La Vision BioTec 独有的多光束快速扫描模式,即1 、2 、4 、8 、16 、32 、64 束光的不同模式选择。 多光束平行扫描技术是指入射光经过分光器,分解为64束光,同时进入显微镜,通过物镜聚焦在样品上,通过XY扫描器利用这64束光同时进行扫描,并调整Z轴进行三维成像,保证最低的样品损伤的同时极大地提高了扫描速度。
☆ 全球第一个可用软件调节的双光子显微镜: ImSpector Pro 软件支持了先进的扫描模式,并且支持用户在ms 毫秒之内切换扫描区域。因此,TriM Scope 是研究光活化、光释放和光漂白(photo activation, uncaging and FRAP )的理想完美工具。
☆ 同类产品中具有最优的检测效率: TriM Scop 可以支持最多达8 个 non-descanned PMT, NDD 可以是cooled generation III GaAsP PMT 或者APD detector 可以多传输40% 效率的量子,比同类产品具备更佳的检测效率。
☆ 世界上唯一能够支持OPO 技术的显微镜: OPO 技术– 红光和蛋白的激发:经典的Ti:Sa 激光器成像红光的能力是非常有限的,因为经典的激发波长是1125 到1250 nm, 并不在Ti:Sa 激光器的转换范围之类。OPO 技术解决了这个问题,因为它能传输可调的fs 激光脉冲到>1100 nm 的范围。
第一代双光子显微镜 :LaVision BioTec 革新的技术提供了独特的双光子显微镜-TriM Scope I :
☆ 用户可根据需要调节光束模式: 从传统的单光束扫描模式到 La Vision BioTec 的多光束快速扫描模式,即 1 、 2 、 4 、 8 、 16 、 32 、 64 束光的不同模式选择。快速扫描模式即可保证最大可允许 64 束光同时扫描,并且保证最低的样品损伤,主要有下面三个原因 :
Ø 64 束光能够提供单光束的 64 倍荧光强度并且保证低损伤高荧光强度
Ø 保证了高的帧速率
Ø CCD 摄像头比 PMTs 更高灵敏度
☆ TriM Scope 可以提供最多达 8 个 NDD 摄像头给经典的单光束扫描显微镜 , 2 个 CCD 摄像头, 1 个 TCSPC 探测器为 FILM ( Fluorescence Lifetime Imaging Microscope )测量。 3 个 NDD 可以安装到靠近物镜的位置, 2 个 NDD 可以插入到传送器。
☆ LaVision BioTec 的 ImSpector Pro 软件支持了先进的扫描模式,并且支持用户在 ms 毫秒之内切换扫描区域。 因此, TriM Scope 是研究光活化、光释放和光漂白( photo activation, uncaging and FRAP )的理想完美工具。
☆ TriM Scope 还可以结合 1 个 OPO 使用 , OPO 可以转换 Ti:Sa 激光器的波长从 800-880 nm 转变到 1100-1300 nm 。因此红光染料或者蛋白质可以被有效地激发出双光子,保证了很低的漂白率和最深的穿透深度。 LaVision BioTec 可以同时使用 Ti:Sa 激光和 OPO 来扫描,就能同时激发出绿 / 黄和红光。
Mitochondria Hela cells human skin Biopsie of Lung SHG & Red in Zebrafish Image in Lung Slice 第二代双光子显微镜 : LaVision BioTec 最新的双光子显微镜- 第二代双光子显微镜TriM Scope II 具有新的特点: - 自动校准的双光子显微镜
- 穿透最深的样品深度,并能应用OPO 技术
- 可升级到LaVision BioTec 的64 束光分光技术
- 多用户使用环境中的双光子显微镜
TriM Scope II 双光子显微镜提供了第二代的双光子显微镜,并且在各种使用环境下能够完成快速、深度成像。基本配置是单光束扫描元件,包括正置机身和2 个靠近物镜的NDD 检测器。作为选件,该显微镜可以配置:
☆ LaVision BioTec 专利的光学分光器,用于64路光束的平行扫描
☆ 最多可达到8 个NDD检测器
☆ 各种不同的CCD 摄像头
☆ LaVision BioTec 的快速TCSPS检测器
☆ 用于共聚焦检测的descanned 检测器
☆ 预啁啾补偿器
☆ OPO 技术